Kullanıcı Oyu: 5 / 5

Yıldız etkinYıldız etkinYıldız etkinYıldız etkinYıldız etkin
 

Ganoderma lucidum polisakkarit, protein arjinin metiltransferaz 6 sinyal yolu yoluyla prostat kanseri hücre göçünü inhibe eder.

Özet

Prostat kanseri, dünya çapında erkeklerde en sık görülen malign tümör türlerinden biridir ve insidans ve mortalite hızı giderek artmaktadır. Günümüzde insan prostat kanserinde büyüme ve göçün moleküler mekanizmaları tam olarak aydınlatılamamıştır. Çalışmalar Ganoderma lucidum polisakkaritlerinin (GLP) kanseri önleyebileceğini göstermiştir. Bu nedenle bu çalışma, GLP'nin hücre büyümesi ve LNCaP insan prostat kanseri hücrelerinin göçü üzerindeki etkisini ve moleküler mekanizmasını araştırmıştır. LNCaP hücreleri, bir protein arjinin metiltransferaz 6 (PRMT6) aşırı ekspresyon plazmidi veya PRMT6 küçük enterferanslı (si) RNA ile transfekte edildi. Hücre büyümesi ve migrasyonu ve PRMT6 sinyalleme ile ilişkili proteinlerin ekspresyonu, 5 ve 20 ug / ml GLP ile tedavi edildikten sonra araştırıldı. Sonuçlar, GLP'nin hücre büyümesini, indüklenmiş hücre döngüsü durdurmasını, PRMT6'yı, sikline bağımlı kinaz 2'yi (CDK2), fokal adhezyon kinazını (FAK) ve steroid reseptörü koaktivatörünü (SRC) ekspresyonunu ve LNCaP hücrelerinde artmış p21 ekspresyonunu inhibe ettiğini gösterdi. bir Coulter sayacı, akış sitometrisi ve ters transkripsiyon-kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu ve western blotlama kullanılarak belirlendiği gibi. Ayrıca, GLP, Transwell migrasyonu ve çizilme deneyleri ile belirlendiği gibi hücre göçünü ve PRMT6 aşırı ifade plazmidi ile transfekte edilmiş LNCaP hücrelerinde değiştirilmiş CDK2, FAK, SRC ve p21 ekspresyonunu önemli ölçüde inhibe etmiştir. Buna karşılık, siRNA ile PRMT6 knockdown, GLP'nin hücre migrasyonu üzerindeki etkisini azaltmıştır. Bu sonuçlar GLP'nin hücre büyümesini, hücre döngüsünü ve hücre göçünü inhibe etmede etkili olduğunu ve GLP'nin hücre migrasyonu üzerindeki baskılayıcı etkisinin PRMT6 sinyal yolu yoluyla olabileceğini göstermektedir. Bu nedenle, GLP'nin prostat kanseri tedavisinde uygulamalarla bir tümör baskılayıcı olarak rol oynayabileceği önerilmektedir. Bu çalışmanın sonuçları, GLP'nin bir terapötik ajan olarak araştırılması için hem ön teorik hem de deneysel temel sağlamaktadır.

Giriş

Prostat kanseri, Avrupa ve Amerika Birleşik Devletleri'nde en yaygın malign tümör türlerinden biridir (1,2). Prostat kanseri, erkeklerde en yaygın ikinci cilt dışı kanserdir ve dünya genelinde erkeklerde kansere bağlı mortalitenin beşinci önde gelen nedenidir. 2008 yılında dünya çapında prostat kanseri teşhisi konan erkeklerin toplam% 14'ü (1,22,000) Asya Pasifik bölgesinde, Japonya'da% 32, Çin'de% 28 ve Avustralya'da% 15 idi (3). Son zamanlarda, Asya ülkelerinin çoğunda prostat kanserinin insidansı ve mortalitesinin 2012 ile 2016 yılları arasında kademeli olarak arttığı bildirilmiştir (4). Prostat kanserinin genetik faktörler, diyet, enfeksiyon ve hormonal faktörlerle ilişkili olduğu saptanmıştır. Günümüzde insan prostat kanserinde büyüme ve göçün moleküler mekanizmaları tam olarak aydınlatılamamıştır.

Protein arginin metiltransferaz 6 (PRMT6), esas olarak çekirdeğinde ifade edilen ve transkripsiyon ve hücre döngüsünün düzenlenmesinde ve DNA tamirinde fonksiyonlara sahip olan tip I arginin metiltransferazdır (5). PRMT6'nın östrojen, progesteron ve glukokortikoid reseptör transkripsiyonunda bir koaktivatör olarak etki gösterdiği de gösterilmiştir. Dahası, El-Andaloussi ve arkadaşları (6), PRMT6'nın DNA bazlı eksizyon onarım regülasyonunda, metile DNA polimeraz β ile bir kompleks oluştururken önemli bir role sahip olduğunu bildirmişlerdir. Birçok çalışma, PRMT6 ekspresyonunun genellikle küçük hücreli olmayan akciğer kanseri (7), hepatosellüler karsinom (8), meme kanseri (9) ve prostat kanseri (10) dahil olmak üzere çeşitli tümör hücrelerinde gözlendiğini göstermiştir. Buna ek olarak, çalışmalar PRMT6 knockdown'un akciğer kanseri ve U2OS insan osteosarkom hücrelerinde hücre büyümesini ve hücre döngüsünü inhibe ettiğini bildirmiştir (11,12). Phalke ve arkadaşları (13), PRMT6'nın, p21 promotörünü direkt olarak bağlayarak ve inhibe ederek onkogenik bir fonksiyon sergilediğini ve bunun da hücre büyümesini uyardığı ve hücre döngüsünü göğüs kanseri hücrelerinde yaşlanmadan koruduğunu bildirmişlerdir. Bazı çalışmalar PRMT6 ekspresyonunun tümör hücrelerinin motilitesi ve invazyonu ile ilişkili olabileceğini bildirmiş olsa da (10,14), hücre büyümesi ve migrasyonunun düzenlenmesinde PRMT6'nın moleküler mekanizmaları tam olarak açıklanmamıştır.

Ganoderma lucidum'un (G. lucidum) kanser (15), kronik bronşit (16), bronşiyal astım (17) ve hepatit (18) 'de koruyucu ve tedavi edici etki gösterdiği bildirilmiştir. Glikoz, mannoz, galaktoz, ksiloz, fukoz ve arabinozdan oluşan polisakkaritler, G. lucidum'un en önemli aktif bileşenlerinden biridir (19). Birkaç in vitro ve in vivo çalışmalar, G. lucidum'dan (GLP) ekstrakte edilen polisakkaritlerin tümörijenez, oksidatif stres, inflamasyon ve immünoregülasyon üzerinde önemli etkiler gösterdiğini göstermiştir (20,21). Xu ve arkadaşları (22), GLP'nin T lenfositler, B lenfositleri, makrofajlar ve doğal öldürücü hücrelerin işlevini etkilediğini bildirmişlerdir. Bazı çalışmalar GLP'nin kolon kanseri (23,24), hepatosellüler karsinom (25), akut miyeloid lösemi (26,27) ve meme dahil olmak üzere birçok kanser hücresi hattında göç üzerine potansiyel antiproliferatif, pro-apoptotik ve inhibitör etkiler sergilediğini bildirmiştir. Kanser (28,29), GLP'nin prostat kanseri hücrelerinin büyümesini ve göçünü düzenlemede etkili olup olmadığı belirlenememiştir. Bu nedenle, bu çalışma, GLP'nin insan prostat kanseri hücrelerinin büyümesi ve göçü üzerindeki etkisini araştırmayı ve altta yatan moleküler mekanizmayı araştırmayı amaçlamıştır.

Malzemeler ve yöntemler

GLP'nin izolasyonu ve analizi

G. lucidum, Shenyang Ziraat Üniversitesi Gıda Bilimi (Shenyang, Çin) tarafından sağlanmıştır. GLP, daha önce tarif edildiği gibi (30) G. lucidum'dan özütlenmiştir. Ham bir polisakkarit numunesi elde etmek için, G. lucidum'un fermantasyon et suyu konsantre edildi ve% 90 alkol ile çökeltildi. Monosakkaritlerin tanımlanması ve kantifikasyonu, bir gaz kromatografisi (GC) analiz cihazı (Beckman Coulter, Inc., Brea, CA, ABD) kullanılarak gerçekleştirilmiştir. He ve arkadaşları (31) tarafından tarif edilen yönteme göre, 5 mg kuru GLP, 5 saat 120 ° C'de 2 M trifloroasetik asit içinde hidrolize edildi. Hidrolizat NaBH4 ile indirgendi ve asetik anhidrit kullanılarak asetillendi. GLP'nin asetillenmiş monosakkaridleri bir GC analizörüne eklenmiştir ve GLP, 4: 2: 10: 1'lik bir molar oranında, GLP'nin arabinoz, galaktoz, glikoz ve ksilozdan oluştuğunu belirleyen gaz kromatografisi ile analiz edilmiştir.

Hücre kültürü ve GLP tedavisi

LNCaP prostat kanseri hücreleri, ScienCell Research Laboratories, Inc.'den (San Diego, California, ABD) satın alındı ​​ve tedarikçi talimatlarına göre kültürlendi. Kültür şişesindeki hücreler üç kez PBS ile yıkandı ve% 10 cenin buzağı serumu (Thermo Fisher Scientific, Inc.) ile takviye edilen RPMI-1640 (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, ABD) içinde kültürlendi; 2 mM glutamin, 100 U / ml penisilin ve 100 mg / ml streptomisin. Toplam 1.2 x 106−1.8 x 107 hücre / oyuk daha sonra 5 ve 20 ug / ml GLP ile muamele edildi ve kontrol hücreleri, 72 saat boyunca 37 ° C'de 0.01 M PBS (1XPBS) 1 ile muamele edildi. Kullanılan GLP konsantrasyonları bir önceki çalışmaya göre seçilmiştir (32). Bütün hücreler 37 ° C'de,% 5 CO2 ve% 100 nemde kültürlendi.

Plazmidler ve küçük enterferans (si) RNA transfeksiyonu

PRMT6 ekspresyon plasmidi pVAX1 (4 ug), Thermo Fisher Scientific, Inc., PRMT6 siRNA'dan (50 mM) satın alınan bir kontrol plazmidi olarak harekete geçti ve negatif kontrol olarak hareket eden siR-Ribo ™ (50 mM), ScienCell Research Laboratories, Inc'den satın alındı. ., üreticinin protokolüne göre 37 ° C'de 4 saat süreyle Lipofectamine 2000 (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) kullanılarak LNCaP hücrelerine transfekte edilmiştir. Aşağıdaki siRNA dizileri kullanıldı: PRMT6 siRNA, 5′-GAGCAAGACACGGACGUUU-3 ′. (GenBank, erişim numarası BC073866). 4 saat transfeksiyonu takiben hücreler daha sonra 5 ve 20 ug / ml GLP ile muamele edildi ve kontrol hücreleri 37 ° C'de 72 saat süreyle 0.01 M PBS (1XPBS) ile işlendi.

Hücre büyüme eğrisi, hücre klonları ve döngü analizi

Hücre büyümesi eğrisi analizi için, 5 x 104 hücre, 12 oyuklu plakaların her bir çukurunda üç kopya halinde kaplanmıştır. Hücreler kültür içinde 37 ° C'de% 10 cenin buzağı serumu, 12 saat% 5 C02 ve% 100 nemde tutuldu ve daha sonra hücreler 4 saat PRMT6 aşırı ifade plazmidi veya PRMT6 siRNA ile transfekte edildi. Transfeksiyondan sonra, 5 x 104 hücre 5 veya 20 ug / ml GLP ile muamele edildi ve kontrol hücreleri 0, 24, 48, 72, 96 ve 120 saat boyunca 37 ° C'de 0.01 M PBS (1XPBS) ile işlendi ve hemen sayıldı Oda sıcaklığında 10 dakika boyunca% 0.4 tripan mavisi solüsyonu ile boyamanın ardından bir optik mikroskop (Olympus Corporation, Tokyo, Japonya) aracılığıyla bir Coulter sayacı (Beckman Coulter, Inc.) tarafından. Toplam 5 x 104 hücre / kuyucuk, üç-bölmeli plakalar halinde üç kopya halinde kaplanmıştır. Hücreler kültür içinde 37 ° C'de% 10 cenin buzağı serumu, 12 saat% 5 C02 ve% 100 nemde tutuldu ve daha sonra hücreler PRMT6 aşırı ifade plazmidi veya PRMT6 siRNA ile 4 saat süreyle transfekte edildi. Transfeksiyondan sonra hücreler 5 ya da 20 ug / ml GLP ve 120 ° C'de 37 ° C'de kontrol olarak 0.01 M PBS (1XPBS) ile muamele edilmiş ve daha sonra oda sıcaklığında 15 dakika boyunca% 4 paraformaldehid kullanılarak sabitlenmiş ve% 0.4 ile lekelenmiştir. oda sıcaklığında 10 dakika boyunca tripan mavi çözelti. Görüntüler, optik mikroskop (Olympus Corporation) büyütme ile alındı, × 100 ve gri değer analizi, beş görünüm alanından imagepro sürüm 6.0 (Media Cybernetics, Inc.) kullanıyordu. Hücre döngüsü analizi için, 2 x 105 hücre% 70 önceden soğutulmuş etanole sabitlenmiş, gece boyunca 4 ° C'de saklanmış ve daha sonra 5 mg / ml RNaz,% 0.1 Triton X-100 ve 20 mg / ml propidyum iyodür içeren PBS ile boyanmıştır. 30 dakika oda sıcaklığında karanlık ve bir akış sitometresi (Attune NxT; Thermo Fisher Scientific, Inc.) kullanılarak analiz edildi. G1, S ve G2 / M fazlarındaki DNA miktarı ModFit 161 LT sürüm 3.0 yazılımı (Verity Software House, Inc., Topsham, ME, ABD) kullanılarak analiz edildi.

Ters transkripsiyon-kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (RT-qPCR)

Total RNA, TRIzol reaktifi (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) kullanılarak izole edildi ve RT, üreticinin protokolüne göre ABScript II cDNA First-Strand Synthesis kiti (ABclonal Biotech Co., Ltd., Wuhan, Çin) kullanılarak yapıldı. cDNA, bir Mx3000P qPCR sistemi (Agilent, Santa Clara, CA, ABD) üzerinde SYBR Premix Ex Taq II (Takara Bio, Inc., Otsu, Japonya) kullanılarak qPCR ile ölçüldü. Tepkime şu şekilde olmuştur: cDNA 2 ul, ddH20 6.4 ul, yukarı akış ve aşağı akış primerleri 0.8 ul, SYBR Premix Ex TaqTMII1 10 ve 20 ul toplam reaksiyon sistemi. Amplifikasyon koşulları: tavlama 56 ° C, 30 saniye; 72 ° C, 30 saniye uzatılması; 45 döngü. Deney 3 kez tekrarlandı. Gen ekspresyon seviyeleri Stratagene Mx3000P yazılımı (versiyon Mx3005P; Shanghai PuDi Biotechnology Co., Ltd., Shanghai, Çin) kullanılarak hesaplandı. Her bir primer setinden üretilen PCR ürünlerinin nispi miktarı, 2 − ΔΔCq yöntemi (33) kullanılarak eşik döngüsü (Ct) sayısı temelinde belirlendi. GAPDH, kullanılan cDNA miktarını normalleştirmek için kontrol olarak kullanıldı. Bağıl ifade = 2 [[Ct (kontrol) geni X-Ct (tedavi) geni X] - [Ct (kontrol) 36B4-Ct (tedavi) 36B4]]. Aşağıdaki primerler kullanıldı: PRMT6, 5′-AGACACGGACGTTTCAGGAG-3 ′ (ileri) ve 5′-CCACTTTGTAGCGCAGCG-3 ′ (ters); p21, 5′-TGAGCCGCGACTGTGATG-3 ′ (ileri) ve 5′-GTCTCGGTGACAAAGTCGAAGTT-3 ′ (ters); sikline bağımlı kinaz 2 (CDK2), 5′-ATGATGACGATGAGGGTGTGCCAA-3 ′ (ileri) ve 5′-GGTCACCATTGCAGCTGTCGAAAT-3 ′ (ters); fokal adhezyon kinaz (FAK), 5′-AGATGTACATCAAGGCATTTA-3 ′ (ileri) ve 5′-AATGCCTTGATGTACATCT-3 ′ (ters); SRC, 5′-GCCTGTTCACCCGTACTCTGCC-3 ′ (ileri) ve 5′-GGTAACTGCCGATCATAAGGT-3 ′ (ters); ve GAPDH, 5′-AGAAGCTGGGGTCATTTG-3 ′ (ileri) ve 5′-AGGGGCCATCCACAGTCTTC-3 ′ (ters).

Western blot analizi

Western blot analizi daha önce tarif edildiği gibi yapıldı (34). Hücre proteini, radyoimmünopresipitasyon lizat kiti (Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd., Pekin, Çin) ile ekstre edildi. Protein konsantrasyonu, bicinchoninic assay protein konsantrasyon kiti (Vazyme, Piscataway, NJ, ABD) ile belirlenmiştir. Kısaca, 20 ug protein / şerit% 10 SDS-PAGE ile yüklenmiş ve çözülmüştür. Protein daha sonra poliviniliden diflorür zarlarına transfer edildi. % 5 sığır serum albümini (Thermo Fisher Scientific, Inc.) ile oda sıcaklığında 1 saat süreyle bloke edildikten sonra, PRMT6'ya karşı birincil antikorlar (1: 500; kat. No. Sc-271744; Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TX) , ABD), p21 (1: 500; kat. No. Sc-136020; Santa Cruz Biotechnology, Inc.), CDK2 (1: 1,000; kedi no. Sc-70829; Santa Cruz Biotechnology, Inc.), FAK ( 1: 200; cat. No. Sc-271195; Santa Cruz Biotechnology, Inc.), SRC (1: 1,000; kedi no. Sc-32789; Santa Cruz Biotechnology, Inc.) ve GAPDH (1: 5,000; kat. no. sc-66163; Santa Cruz Biotechnology, Inc.) 4 ° C'de zarlarla inkübe edildi. 12 saat inkübasyondan sonra, leke yıkanmış ve keçi anti-fare immünoglobulin (Ig) G-at turpu peroksidazı (HRP; 1: 2,000; kat. No.

istatistiksel analiz

Veriler ortalama ± standart sapma olarak sunulmuş ve varyans analizi ve ardından Student-Newman-Keuls post-hoc testi ve SPSS yazılımı kullanılarak Ki-kare testi (versiyon 20.0; IBM Corp., Armonk, NY, ABD) kullanılarak analiz edilmiştir. ). İstatistiksel olarak anlamlı bir fark olduğunu göstermek için P <0.05 kabul edildi.

Sonuçlar

GLP, LNCaP hücrelerinde hücre büyümesini inhibe eder

Farklı GLP konsantrasyonlarının hücre büyümesi üzerindeki etkileri, büyüme eğrisi analizleri ve morfolojik gözlem kullanılarak belirlendi. Sonuçlar, hücrelerin büyüme oranının, 5 saat veya 20 ug / ml GLP gruplarında, 72 saat boyunca inkübasyonu takiben kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, önemli ölçüde azaldığını gösterdi (Şekil 1A). Ayrıca, morfolojik sonuçlar, GLP'nin (5 ve 20 ug / ml) kontrol grubuyla karşılaştırıldığında hücre büyümesini önemli ölçüde inhibe ettiğini de göstermiştir (Şekil 1B-C).

Şekil 1.

GLP, LNCaP hücrelerinin hücre büyümesini inhibe etti. LNCaP hücreleri, RPMI-1640'ta kültürlendi ve 5 veya 20 ug / ml GLP ile işlendi. (A) Büyüme eğrisi analizleri kullanılarak hücrelerin büyüme oranı belirlendi. Hücre büyümesi de (B) morfolojik olarak saptandı ...

GLP, LNCaP hücrelerinde hücre döngüsü tutuklamasını uyarır

GLP'nin hücre döngüsü üzerindeki etkisini araştırmak için akış sitometrisi yapıldı. Sonuçlar, 5 ve 20 ug / ml GLP'nin, kontrol hücrelerine kıyasla doz bağımlı bir şekilde LNCaP hücrelerinin G1 fazında artan sayıda hücresi ile hücre siklüsünün durmasına neden olduğunu gösterdi (Şekil 2).

 

Şekil 2.

GLP, LNCaP prostat kanseri hücrelerinde hücre döngüsü tutulmasını inhibe etti. (A) Akış sitometrisi, GLP'nin hücre döngüsü üzerindeki etkisini araştırmak için yapıldı. Hücre döngüsünün her fazındaki (B) hücre yüzdesi ve G1 fazında aşağıdaki hücrelerin sayısı (C) ...

GLP, LNCaP hücrelerinde hücre göçünü engeller

GLP'nin LNCaP hücrelerinin göçü üzerindeki etkisini araştırmak için transwell ve kazıma testleri yapıldı. Sonuçlar, 5 ve 20 ug / ml GLP'nin kontrol grubuna kıyasla hücre göçünü önemli ölçüde inhibe ettiğini göstermiştir (Şekil 3).

Figür 3.

GLP, LNCaP hücrelerinde hücre göçünü inhibe etti. GLP, (A) Transwell testi ile tripan mavi boyaması ve (B) çizik testi ile belirlenen LNCaP hücrelerinin göçünü inhibe etmiştir. (C) Transwell ve (D) çizik deneyleri için sayısal sonuçlar. Veriler sunuldu ...

GLP'nin, LNCaP hücrelerinde PRMT6 sinyal yolu ve migrasyonla ilişkili proteinler üzerindeki etkisi

GLP'nin, LNCaP hücrelerinde PRMT6 sinyalleşme yolu ve migrasyonla ilişkili proteinler üzerindeki etkisini belirlemek için, PRMT6, p21, CDK2, FAK ve FRC'nin ifadesi, RT-qPCR ve western blot analizi ile belirlenmiştir. Sonuçlar, 5 ve 20 ug / ml GLP'nin PRMT6 ve CDK2 protein ekspresyonunu azalttığını ve p21 ekspresyonunun arttığını göstermiştir (Şekil 4A). Ek olarak, migrasyonla ilişkili proteinlerin FAK ve FRC protein ekspresyonu, GLP gruplarında kontrol grubu ile karşılaştırıldığında azalmıştır (Şekil 4A). MRNA ekspresyonu için sonuçlar, PRMT6, CDK2, FAK ve FRC seviyelerinin, 5 ve 20 ug / ml GLP'de anlamlı bir şekilde azaldığını, p21 seviyelerinin ise kontrol grubuyla karşılaştırıldığında (Şekil 4B-F) önemli ölçüde arttığını göstermiştir.

Şekil 4.

GLP'nin LNCaP hücrelerinde PRMT6 sinyal yolağı üzerindeki etkisi. PRMT6, p21, CDK2, FAK ve SRC'nin mRNA ve protein ifadesi, sırasıyla RT-qPCR ve western blot analizi ile belirlenmiştir. (A) PRMT6, p21, CDK2, FAK ve SRC proteininin ifadesi ...

GLP, LNCaP hücrelerinin PRMT6 sinyal yolu yoluyla göçünü engeller

GLP'nin, PRMT6 sinyal yolu yoluyla LNCaP hücrelerinin göçünü düzenleyip düzenlemediğini belirlemek için, hücreler ya bir PRMT6 aşırı ifade plazmidi ya da PRMT6 siRNA ile transfekte edilmiş ve daha sonra 5 ya da 20 ug / ml GLP ile muamele edilmiştir. Sonuçlar, PRMT6'nın aşırı ekspresyonunun, vektör transfekte edilmiş kontrol ile karşılaştırıldığında PRMT6, CDK2, FAK ve FRC'nin ekspresyonunu ve azaltılmış p21 ifadesini arttırdığını göstermiştir. Aksine, PRMT6 demonte PRMT6, CDK2, FAK ve FRC ekspresyonunu azaltmış ve vektör transfekte edilmiş kontrol ile karşılaştırıldığında p21 ekspresyonunu arttırmıştır. Sonuçlar ayrıca GLP tedavisinin PRMT6, CDK2, FAK ve FRC ekspresyonunu inhibe ettiğini ve PRMT6 aşırı ekspresyon plazmidi ile transfekte edilen hücrelerde p21 ekspresyonunu arttırdığını, siRNA ile PRMT6 knockdown'un CDK2, p21, FAK ve FRC ekspresyonu üzerindeki GLP etkisini inhibe ettiğini göstermiştir. Şekil 5). Ek olarak, Transwell sonuçları, GLP'nin, PRMT6 aşırı ifade plazmidini transfekte edilen hücrelerin göçünü önemli ölçüde inhibe ettiğini ve PRMT6 siRNA ile transfekte edilmiş hücrelerin, PRMT6 siRNA'nın, GLP'nin hücre göçü üzerindeki etkilerini önlediğini gösterdiğini doğrulamıştır (Şekil 6).

Şekil 5.

GLP, LNCaP hücrelerinde PRMT6 sinyal yolunu inhibe etti. LNCaP hücreleri, bir PRMT6 aşırı ifade plazmidi veya PRMT6 siRNA ile transfekte edildi ve daha sonra 5 veya 20 ug / ml GLP ile işlendi. PRMT6, p21, CDK2, protein ifadesi ...

Şekil 6.

GLP, LNCaP hücrelerinin PRMT6 sinyal yolu yoluyla göçünü inhibe etti. LNCaP hücreleri bir PRMT6 aşırı ifade plazmidi veya PRMT6 siRNA ile transfekte edildi ve daha sonra 5 veya 20 ug / ml GLP ile muamele edildi. Taşınan Temsilcisi ...

Tartışma

Son yıllarda, Çin'de prostat kanseri ile ilişkili morbidite ve mortalite artmaktadır. Bu çalışma GLP'nin hücre büyümesini, hücre döngüsünü ve hücre göçünü inhibe ettiğini, PRMT6, CDK2, FAK ve FRC ekspresyonunu azalttığını ve LNCaP hücrelerinde p21 ekspresyonunu arttırdığını göstermiştir. Ayrıca, sonuçlar GLP'nin hücre göçünü önemli ölçüde inhibe ettiğini ve bir PRMT6 aşırı ifade plazmidi ile transfekte edilen hücrelerde CDK2, FAK, FRC ve p21 ekspresyonunu değiştirdiğini göstermiştir. Buna karşılık, siRNA ile PRMT6 knockdown, GLP'nin hücre göçü ve CDK2, FAK, FRC ve p21 ifadesi üzerindeki etkisini azaltmıştır.

Ghafar ve ark.nın (25) yaptığı bir çalışmada, GLP'nin hematom hücrelerinin büyümesini önemli ölçüde inhibe ettiğini ve T hücre proliferasyonunun düzenleyici T hücresi baskılanmasını ortadan kaldırdığını gösteren bir çalışmada benzer sonuçlar bildirilmiştir. Li ve arkadaşları (36), GLP'nin, PC-3 M insan prostat karsinoma hücrelerinin umbilikal kord vasküler endotelyal hücrelere yapışmasını azalttığını da bildirmişlerdir. Ayrıca, Liang ve arkadaşları (23), GLP'nin insan kolon kanseri hücrelerinde migrasyonu inhibe ederek ve apoptozu indükleyerek potansiyel antitümör aktivite gösterdiklerini göstermiştir. Buna ek olarak, daha önce yapılan bir çalışmada, Ganoderma atrum polisakkaritinin, sarkom 180 taşıyan farelerde apoptozis ve bağışıklık sistemi aktivasyonu indüksiyonu yoluyla aracılık ettiği siklofosfamidin antitümör etkisini iyileştirdiği bildirilmiştir (37). Kollektif olarak, mevcut çalışmanın sonuçları GLP'nin, LNCaP hücrelerinin büyümesini ve göçünü inhibe ederek kısmen aracılık edebilecek antitümör aktivitesi sergilediğini göstermiştir.

PRMT6 ekspresyonunun çeşitli tümör hücrelerinde artmış olduğu bildirilmiştir ve tümör hücrelerinde hücre döngüsü düzenlemesine katılabilir (38-41). p21, osteosarkom (42,43), karaciğer kanseri (44) ve prostat kanseri (45-47) dahil olmak üzere birçok tümör tipinin gelişiminde rol oynayan önemli bir PRMT6 genidir. Ek olarak, p21, G1 hücre döngüsü tutuklanmasını desteklemektedir (48,49). CDK2, kanser hücrelerinin göçünü ve hareketliliğini modüle ederek çeşitli tümör tiplerinde önemli rollere sahiptir (50,51). FAK ve FRC, hepatoselüler karsinom (52), meme kanseri (53) ve U87-MG glioma (54) gibi bazı tümör tiplerinin gelişimi ile yakından ilişkili olan tümör hücre migrasyonunun anahtar belirleyicileridir. Mevcut çalışmada, sonuçlar, PRMT6'nın aşırı ekspresyonunun, PRMT6, CDK2, FAK ve FRC'nin ekspresyonunu önemli ölçüde arttırdığını ve p21 ekspresyonunun azaldığını göstermiştir. Buna karşılık, PRMT6 demonte, PRMT6, CDK2, FAK ve FRC ekspresyonunu ve LNCaP hücrelerinde artmış p21 ekspresyonunu önemli ölçüde azaltmıştır. Benzer bir rapor, PRMT6'nın demonte edilmesinin meme kanseri hücrelerinde p21 ekspresyonunu ve indükte hücre döngüsü tutulumunu önemli ölçüde artırdığını göstermiştir (13). Ek olarak, Wang ve arkadaşları (55), PRMT6 aşırı ifadesinin, G1 fazında hücre döngüsü hapsini azalttığını ve A549 insan akciğer adenokarsinom hücrelerinde p16-CDK4 ilişkisinin yoğunluğunu azalttığını göstermiştir. Önceki bir çalışma, PRMT6 aşın ekspresyonunun, kontrollere kıyasla MCF7 göğüs kanseri hücrelerinin hücre büyümesini ve koloni oluşturma yeteneğini önemli ölçüde azalttığını göstermiştir (14). PRMT6'nın, U2OS insan osteosarkom hücrelerinin proliferasyonunu desteklediği ve p21 ekspresyonunu baskılayarak hücre yaşlanmasını inhibe ettiği de bildirilmiştir (40,56). Sonuç olarak, bu sonuçlar PRMT6 demonte etmenin, L21aP hücrelerinde p21 ekspresyonunu ve downregulating CDK2 ekspresyonunu yukarı regüle ederek hücre migrasyonunu inhibe edebileceğini göstermektedir.

Bununla birlikte, GLP'nin makrofaj aktivasyonu ile S180 tümör taşıyan farelerin proliferasyonunu ve toll-benzeri reseptör 4-aracılı nükleer faktör-κB sinyal yolu (57) yoluyla bağışıklık sistemi fonksiyonlarının iyileşmesini önemli ölçüde inhibe ettiği bildirilmiştir. Mitojenle aktive olan protein kinaz (MAPK) sinyal yolunun da GLP-indüklü RAW264.7 hücrelerinde aktive olduğu rapor edilmiştir (58). Ek olarak, Liang ve arkadaşları (23) tarafından yapılan bir çalışma, GLP'nin insan kolon kanseri hücrelerinde Fas / kaspaz bağımlı bir sinyal yolunu aktive ederek göç ve apoptozu inhibe ettiğini göstermiştir. Bu çalışmanın sonuçları, GLP'nin bir PRMT6 aşırı ekspresyon plazmidi ile transfekte edilmiş LNCaP hücrelerinin göçünü önemli ölçüde inhibe ettiğini gösterirken PRMT6 nakavt, GLP'nin hücre göçü üzerindeki etkisini azaltmıştır, bu da GLP'nin, hücrelerin PRMT6 sinyal yolu yoluyla göçünü önleyebileceğini göstermektedir. Benzer bir sonuç Wu ve arkadaşları tarafından (59), GLP'nin esas olarak FAK-Src sinyal yolunu aktive ederek MDA-MB-231 göğüs kanseri hücrelerinin göçünü inhibe ettiğini göstermişlerdir. Buna ek olarak, Yang ve arkadaşları (26), GLP'nin hücre dışı sinyal düzenlenmiş kinaz / MAPK yolunu bloke ederek hücre döngüsünü durdurma ve apoptozu indüklediğini ve HL-60 akut lösemi hücrelerinde p38 ve c-Jun N-terminal kinaz MAPK yollarının aktive olduğunu bildirmişlerdir. . G. lucidum'dan triterpenin zenginleştirilmiş bir özütü olan WEES-G6'nın, hepatoselüler karsinomda Huh-7 insan hepatoma hücrelerinin büyümesini ve aktive edilmiş JNK ve p38 MAPK yollarını inhibe ettiği bildirilmiştir (60).

Sonuç olarak, bu çalışmanın sonuçları GLP'nin LNCaP hücrelerinin büyümesini, hücre döngüsünü ve göçünü önemli ölçüde inhibe ettiğini göstermiştir. Ek olarak, GLP, bir PRMT6 aşırı ifade plazmidi ile transfekte edilen hücrelerin göçünü inhibe ederken, PRMT6 nakavt, GLP'nin hücre göçü üzerindeki etkisini azaltmıştır, bu da GLP'nin PRMT6 sinyal yolu yoluyla LNCaP hücre göçünü inhibe edebileceğini göstermektedir. Bu nedenle, GLP'nin bir tümör baskılayıcı olarak etki gösterebileceği, prostat kanseri için bir tedavi olarak potansiyele sahip olduğu önerilmektedir. Bu çalışmanın sonuçları, GLP'nin bir terapötik ajan olarak araştırılması için hem ön teorik hem de deneysel temel sağlamaktadır.

 

Çinde 19 Uzman Doktorun kanser hastaları üzerinde yapmış olduğu detaylı beslenme bilgi düzeyi çalışması

1Comprehensive Oncology Department, National Cancer Center/Cancer Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College,

...

DNA damaging potential of Ganoderma lucidum extracts

Ganoderma lucidum özlerinin DNA hasar potansiyeli

Ganoderma lucidum polisakkarit, protein arjinin metiltransferaz 6 sinyal yolu yoluyla prostat kanseri hücre göçünü inhibe eder.

Özet

Prostat kanseri, dünya çapında erkeklerde en sık görülen malign tümör türlerinden biridir ve insidans ve mortalite

...

Arthur C. Brown, "Alternatif Kanser Terapisinin Dünyasına Tam Rehber" kitabında, kanser için 6 temel doğal şifa prensibi tanımlamaktadır.

Ganoderma bitkisi kanser için belirtilen 6 iyileştirme prensibinin neredeyse tamamına uygun olduğunu bulmak oldukça

...